• <s id="86al1"></s>
    <button id="86al1"></button>
    1. <s id="86al1"><object id="86al1"><blockquote id="86al1"></blockquote></object></s>
      <tbody id="86al1"><pre id="86al1"></pre></tbody>

      主營產品:

      美國PE耗材、安捷倫耗材、賽默飛熱電耗材 、沃特世耗材、島津耗材、瓦里安耗材
      服務熱線:

      021-54156088

      聯系我們/CONTACT US

      聯系人:程先生

      電 話:021-54156088

      手 機:15202161235

      地 址:上海市閔行區滬光東路88號203-205室

      郵 編:201108

      傳 真:021-54161159

      郵 箱:ch@shengbinyq.com

      阿儀網商鋪:http://www.app17.com/c124399/

      手機網站:m.shengbin-sh.com

      產品分類/PRODUCT CLASS

      安捷倫耗材配件Agilent

      美國PE耗材配件PerkinElmer

      賽默飛熱電耗材配件Thermo

      島津耗材配件Shimadzu

      沃特世耗材配件Waters

      瓦里安耗材配件Varian

      通用實驗室耗材

      SBI進樣瓶樣品瓶蓋

      Millipore密理博耗材配件

      分析檢測儀器

      質譜儀器

      光譜標樣|工業設備配件

      化學試劑標準品

      實驗室通用儀器設備

      檢碩耗材配件

      環境設備耗材配件

      大韓設備耗材

      質譜儀

      二手儀器設備

      生命科學試劑耗材

      色譜柱

      技術文章

      RNA質量控制

      點擊次數:788   發布時間:2021/8/18 8:39:03

                                                                                   RNA質量控制
                                                                        圣賓儀器科技上海有限公司
         1. 相關概念 
       
      RNA質檢參數OD260/OD280、OD260/OD230的意義。 
       
      260、280、320、230nm下的吸光度分別代表了核酸、蛋白質、鹽濃度和有機溶劑的值。 
       
      A230: 測定其它碳源物質,如酚,糖類等。 
       
      A260:核酸的吸收峰測,測RNA,DNA,引物等的濃度用的。
       
      A280:蛋白質的吸收峰。
       
      一般的,我們只看OD260/OD280(Ratio,R)在1.8~2.1范圍內時,我們認為 RNA中蛋白的污染是可以容忍的,不過要注意,當用Tris作為緩沖液檢測吸光度時,R 值可能會大于 2(一般應該是<2.2的)。當R < 1.8時,溶液中蛋白的污染比較明顯,可以根據自己的需要決定這份RNA 的命運。當R > 2.2時,說明RNA已經水解成單核酸了。純RNA的OD260/OD280的比值為2.0。 
       
      2. RNA質量檢驗 
       
      RNA樣品的品質檢測一般分為總量,純度與完整性三大項?偭浚何⒘糠止夤舛扔嫓y260nm吸收值計算。 
       
      純度:微量分光光度計測260nm/230nm吸收值的比值,用于評估有機溶劑殘留;260nm/280nm吸收值的比值,用于評估蛋白質污染比例。
       
      完整性:以Agilent Bioanalyzer進行毛細管電泳(capillary electrophoresis),并以軟件的RIN(RNA Integrity Number)分數評估,10為RNA完整性zui,0為差。2.1 RNA純度 
       
      RNA在純化過程中容易受到DNA、蛋白質及有機溶劑的影響,這些殘存物將會影響以后的操作。光譜分析(NANODROP)利用物質對不同波長光的吸收度的不同,可以鑒別出溶液純度及濃度。RNA溶液的A260/A280的比值是一種RNA純度檢測方法,比值范圍一般為1.8-2.1。各項實驗對RNA純度要求不一,比如即使比值超出這個范圍,RNA樣品也一樣可以用于一些普通實驗中,如Northern
       
      雜交、RT-PCR、熒光定量PCR和RNA酶保護等實驗。RNA Purity test: 1. protein contamination
       
      OD260/OD280 ratio: 1.8-2.1 recommended 2. Organic solvent contamination: OD260/OD230 ratio: > 1.8 recommended OD260/OD270 ratio: > 1.2 recommended 2.2  RNA完整性 
       
      除純度以外,RNA的完整性也非常重要。自然界無所不在的RNase使RNA保
       
      存相當不易。由于RNase廣泛存在而穩定,一般反應不需要輔助因子。因而RNA制劑中只要存在少量的RNase就會引起RNA在制備與分析過程中的降解。1)電泳法 
       
      2)流式芯片(2100 Bioanalyzer) 
       
      電泳顯示有無基因組DNA污染,有無RNA降解(28S, 18S條帶);通過目測28S和18S條帶的比例可以初步評價總RNA的質量。一般認為28S:18S >= 2可以初步判定總RNA完整性較好。跑電泳,RNA應出現清楚的兩條Band (28S/18S rRNA),有時會有第三條band (5S rRNA),上方不可出現DNA污染條帶,28S/18S應近似兩倍。28S和18S核糖體RNA條帶非常亮而濃(其大小決定于用于抽提RNA的物種類型),在加樣孔位于圖片上方的看圖模式下,上面一條帶(28S)的密度大約是下面一條帶(18S)的2倍。下方還有可能觀察到一個更小稍微擴散的帶,它由低分子量的RNA(tRNA和5S核糖體RNA等)組成。在28S和18S 核糖體帶之間一般可以看到一片彌散的EB染色物質,可能是由mRNA和其它異型RNA組成。RNA制備過程中如果出現DNA污染,將會在28S核糖體帶的上面出現,即更高分子量的彌散遷移物質或者帶,此時zui需要對總RNA進行純化。RNA的降解則表現為核糖體RNA帶的彌散。上述方法可以清楚分析RNA的完整性,但需樣本量過多。流式技術需求量降到25ng,除28S,18S外不應該有其他峰值,28S/18S應該在1.8-2.1之間。Integrity test by electrophoresis
                                                                                                                                                        本篇轉載至實驗之家
       

      原創作者:圣賓儀器科技(上海)有限公司

      首 頁| 公司介紹| 產品展示| 公司新聞| 技術文章| 聯系我們| 客戶留言

      阿儀網 設計制作,未經允許翻錄必究. 聯系人:程先生 聯系電話:021-54156088 ICP備案號:滬ICP備17010456號-2 總訪問量:2540466 管理登錄

      主營產品:美國PE耗材、安捷倫耗材、賽默飛熱電耗材 、沃特世耗材、島津耗材、瓦里安耗材

      掃一掃,關注我們!

      客服中心

      客戶服務熱線

      02154156088

      15202161235


      工作時間

      8:30-17:30

      展開客服
      久久久久国色aV免费观看_亚洲va成人片在线看不卡_国产成人亚洲综合无码小说
    2. <s id="86al1"></s>
      <button id="86al1"></button>
      1. <s id="86al1"><object id="86al1"><blockquote id="86al1"></blockquote></object></s>
        <tbody id="86al1"><pre id="86al1"></pre></tbody>